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血清中磷脂去除的分析(Copure? PRP)

2019-08-02 11:11:42
逗點生物
4873
最后編輯:逗點生物 于 2020-06-03 10:32:09

一诈绷、設備和材料

1)biocomma® CommaMix 多功能混勻儀
2)Copure® PRP 磷脂去除柱
3) Copure® PPT 蛋白沉淀過濾板

二、儀器條件

儀器:FH-6000MD UPLC-MS/MS
色譜柱:Hypersil Gol.D aQ (2.1mm×100 mm, 1.9 μm)
柱溫:35 ℃
樣品溫度:10 ℃
進樣量:5 μL
流動相:A:Buffer A B:Buffer B
洗脫方式:梯度洗脫

表 1 流動相梯度洗脫條件

離子化方式:ESI+ 電噴霧電壓:3500 V
鞘氣壓力:40 arb 輔氣壓力:2 arb
離子傳輸管:350 ℃ 輔氣溫度:320 ℃
采集方式:Precursor Ion Scan ( 子離子 184 m/z圃星,母
離子范圍 184~1000 m/z)

三怒央、實驗步驟

1、樣品提取
1) 將 Copure® PPT 96 蛋白沉淀過濾板置于 96 孔收集板上丘苗,加入 400 μL 沉淀劑项请。
2) 將 100 μL 血清樣本分裝加入到 96 孔蛋白沉淀過濾板各孔中。
3) 將蛋白沉淀板上端各孔封膜后梦迂,置于多功能混勻儀上肚轴,調(diào)節(jié)轉速到 2000 rpm,充分混合 2 min豫阻,然后靜置10 min稠还,待蛋白沉淀完全伞缺。
4) 3000 rpm離心2 min,收集過濾液到96孔收集板中叁丧,待凈化啤誊。
2、樣品凈化
1)活化: 向Copure® PRP及各品牌去磷脂產(chǎn)品(規(guī)格均為 60 mg/1 mL)中加 2 mL 甲醇拥娄,棄去流出液坷衍。
2)凈化: 取上述樣品提取步驟,經(jīng)過血清蛋白沉淀過濾后的收集液条舔,過磷脂去除產(chǎn)品,收集流出液乏矾,過 0.22 μm 有機濾膜孟抗,上機分析。


四钻心、實驗結果

表 2 不同品牌的磷脂去除產(chǎn)品對比效果

結論:經(jīng)過 UPLC-MS/MS 檢測分析凄硼,逗點生物磷脂去除產(chǎn)品與市面類似產(chǎn)品的磷脂去除效果相當,均可滿足測試要求捷沸。

五摊沉、訂購信息